Effects of Chemical inhibition of histone deacetylase proteins in the growth and virulence of Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid / Efectos de la inhibición química de las proteínas desacetilasas de histonas en el crecimiento y la virulencia de Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid

Abstract Chromatin remodeling enzymes are important "writers'', "readers'' and "erasers'' of the epigenetic code. These proteins are responsible for the placement, recognition, and removal of molecular marks in histone tails that trigger structural and functional changes in chromatin. This is also the case for histone deacetylases (HDACs), i.e., enzymes that remove acetyl groups from histone tails, signaling heterochromatin formation. Chromatin remodeling is necessary for cell differentiation processes in eukaryotes, and fungal pathogenesis in plants includes many adaptations to cause disease. Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid. is a nonspe-cific, necrotrophic ascomycete phytopathogen that causes charcoal root disease. M. phaseolina is a frequent and highly destructive pathogen in crops such as common beans (Phaseolus vulgaris L.), particularly under both water and high temperature stresses. Here, we evaluated the effects of the classical HDAC inhibitor trichostatin A (TSA) on M. phaseolina in vitro growth and virulence. During inhibition assays, the growth of M. phaseolina in solid media, as well as the size of the microsclerotia, were reduced (p <0.05), and the colony morphology was remark-ably affected. Under greenhouse experiments, treatment with TSA reduced (p <0.05) fungal virulence in common bean cv. BAT 477. Tests of LIPK, MAC1 and PMK1 gene expression during the interaction of fungi with BAT 477 revealed noticeable deregulation. Our results provide additional evidence about the role of HATs and HDACs in important biological processes of M. phaseolina.

Resumen Las enzimas remodeladoras de la cromatina son «escritores¼, «lectores¼ y «borradores¼ importantes del código epigenético. Estas proteínas son responsables de la localización, el reconocimiento y la remoción de las marcas moleculares sobre las terminaciones de las histonas que desencadenan cambios funcionales y estructurales en la cromatina. Es el caso de las desacetilasas de histonas (HDAC), enzimas que remueven grupos acetilo de las «colas¼ de las histonas, señalizando la formación de heterocromatina. La anterior es una actividad necesaria en los procesos de diferenciación celular de los eucariotas, y se conoce que la patogénesis fúngica en las plantas requiere de adaptaciones diversas para ocasionar enfermedad. Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid. es un ascomiceto fitopatógeno, necrótrofo e inespecífico, causante de la pudrición carbonosa. Este es un hongo frecuente y altamente destructivo en cultivos como fríjol común (Phaseolus vulgaris L.), particularmente bajo estrés hídrico y térmico. En este trabajo evaluamos los efectos del inhibidor de HDAC clásicas tricostatina A (TSA) sobre el crecimiento in vitro y la virulencia de M. phaseolina. El TSA redujo el crecimiento de M. phaseolina en medio sólido y el tamano de los microesclerocios (p < 0,05), lo que afectó la morfología colonial. En invernadero, el tratamiento con TSA disminuyó (p<0,05) la gravedad de la infección en la variedad de frijol BAT 477. La expresión de los genes de patogenicidad LIPK, MAC1 y PMK1 durante la interacción del hongo con la planta reveló una desregulación importante. Estos resultados proporcionan evidencia adicional del papel que cumplen las HDAC en la regulación de procesos biológicos fundamentales de M. phaseolina. © 2023 Asociación Argentina de Microbiología. Publicado por Elsevier Espana, S.L.U.

Therapeutic potential of testosterone on sperm parameters and chromatin status in fresh and thawed normo and asthenozoospermic samples / Potencial terapéutico de la testosterona sobre los parámetros espermáticos y el estado de la cromatina en muestras frescas y descongeladas de normo y astenozoospermia

Background: Hormonal changes alter the physiological level of ROS and cause oxidative stress in the cell. As estimated, hormonal deficiencies, environmental and ideological factors make up about 25% of male infertility. Pathogenic reactive oxygen species (ROS) is a chief cause of unexplained infertility. Limited studies exist on the effects of testosterone on human sperm culture. Therefore, in the current study, the effect of different doses of testosterone on sperm parameters and chromatin quality was investigated. Materials and methods: Semen samples from 15 normospermic and 15 asthenospermic patients were prepared by swim up method, and then were divided into four groups by exposing to different concentrations of testosterone (1, 10, and 100nM) for 45min. Samples without any intervention were considered as control group. All samples were washed twice. Sperm parameters and chromatin protamination were assessed in each group and the remains were frozen. After two weeks, all tests were repeated for sperm thawed. Also, the MSOM technique was used to determine the sperm morphology of class 1. Results: Although sperm parameters were not show any significant differences in normospermic and asthenospermic samples exposed to different concentrations of testosterone before and after freezing, chromatin protamination was significantly decreased in the normospermic samples exposed to 10nM of testosterone before freezing (p<0.006), as well as 1 and 10nM of testosterone after freezing compared to control samples (p=0.001 and p=0.0009, respectively). (AU)

Antecedentes: Los cambios hormonales alteran el nivel fisiológico de las especies reactivas de oxígeno (reactive oxygen species [ROS]) patógenas y provocan estrés oxidativo en la célula. Según estimaciones, las deficiencias hormonales, los factores ambientales y los ideológicos constituyen alrededor del 25% de la infertilidad masculina. Las ROS son una causa principal de infertilidad inexplicable. Existen estudios limitados sobre los efectos de la testosterona en el cultivo de esperma humano. Por lo tanto, en el estudio actual se ha investigado el efecto de diferentes dosis de testosterona sobre los parámetros del esperma y la calidad de la cromatina. Materiales y métodos: Se prepararon muestras de semen de 15 pacientes normospérmicos y 15 astenospérmicos mediante el método swim up, y luego se dividieron en cuatro grupos exponiéndolos a diferentes concentraciones de testosterona (1, 10 y 100nM) durante 45min. Las muestras sin ninguna intervención se consideraron como grupo control. Todas las muestras se lavaron dos veces. En cada grupo se evaluaron los parámetros espermáticos y la protaminación de la cromatina, y los restos se congelaron. Dos semanas después se repitieron todas las pruebas de esperma descongelado. Asimismo, se utilizó la técnica MSOM para determinar la morfología espermática de clase 1. Resultados: Aunque los parámetros espermáticos no mostraron diferencias significativas en las muestras normospérmicas y astenospérmicas expuestas a diferentes concentraciones de testosterona antes y después de la congelación, la protaminación de la cromatina disminuyó significativamente en las muestras normospérmicas expuestas a 10nM de testosterona antes de la congelación (p<0,006), así como a 1 y 10nM de testosterona después de la congelación, en comparación con las muestras de control (p=0,001 y p=0,0009, respectivamente). (AU)

Effects of chemical inhibition of histone deacetylase proteins in the growth and virulence of Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid.

Chromatin remodeling enzymes are important "writers", "readers" and "erasers" of the epigenetic code. These proteins are responsible for the placement, recognition, and removal of molecular marks in histone tails that trigger structural and functional changes in chromatin. This is also the case for histone deacetylases (HDACs), i.e., enzymes that remove acetyl groups from histone tails, signaling heterochromatin formation. Chromatin remodeling is necessary for cell differentiation processes in eukaryotes, and fungal pathogenesis in plants includes many adaptations to cause disease. Macrophomina phaseolina (Tassi) Goid. is a nonspecific, necrotrophic ascomycete phytopathogen that causes charcoal root disease. M. phaseolina is a frequent and highly destructive pathogen in crops such as common beans (Phaseolus vulgaris L.), particularly under both water and high temperature stresses. Here, we evaluated the effects of the classical HDAC inhibitor trichostatin A (TSA) on M. phaseolinain vitro growth and virulence. During inhibition assays, the growth of M. phaseolina in solid media, as well as the size of the microsclerotia, were reduced (p<0.05), and the colony morphology was remarkably affected. Under greenhouse experiments, treatment with TSA reduced (p<0.05) fungal virulence in common bean cv. BAT 477. Tests of LIPK, MAC1 and PMK1 gene expression during the interaction of fungi with BAT 477 revealed noticeable deregulation. Our results provide additional evidence about the role of HATs and HDACs in important biological processes of M. phaseolina.

Therapeutic potential of testosterone on sperm parameters and chromatin status in fresh and thawed normo and asthenozoospermic samples.

BACKGROUND: Hormonal changes alter the physiological level of ROS and cause oxidative stress in the cell. As estimated, hormonal deficiencies, environmental and ideological factors make up about 25% of male infertility. Pathogenic reactive oxygen species (ROS) is a chief cause of unexplained infertility. Limited studies exist on the effects of testosterone on human sperm culture. Therefore, in the current study, the effect of different doses of testosterone on sperm parameters and chromatin quality was investigated. MATERIALS AND METHODS: Semen samples from 15 normospermic and 15 asthenospermic patients were prepared by swim up method, and then were divided into four groups by exposing to different concentrations of testosterone (1, 10, and 100nM) for 45min. Samples without any intervention were considered as control group. All samples were washed twice. Sperm parameters and chromatin protamination were assessed in each group and the remains were frozen. After two weeks, all tests were repeated for sperm thawed. Also, the MSOM technique was used to determine the sperm morphology of class 1. RESULTS: Although sperm parameters were not show any significant differences in normospermic and asthenospermic samples exposed to different concentrations of testosterone before and after freezing, chromatin protamination was significantly decreased in the normospermic samples exposed to 10nM of testosterone before freezing (p<0.006), as well as 1 and 10nM of testosterone after freezing compared to control samples (p=0.001 and p=0.0009, respectively). Similarly, chromatin protamination in the asthenospermic samples was significantly decreased at concentration of 1nM of testosterone before and after freezing (p=0.0014 and p=0.0004, respectively), and at concentration of 10nM of testosterone before and after freezing (p=0.0009, p=0.0007) compared to control samples. CONCLUSION: Using a low dose of testosterone in the sperm culture medium, has positive effects on chromatin quality.

Response and tolerance mechanism of food crops under high temperature stress: a review / Mecanismo de resposta e tolerância de culturas alimentares sob estresse de alta temperatura: uma revisão

High temperature stress events are critical factors inhibiting crop yield. Meanwhile, world population is growing very rapidly and will be reached up to 9 billion by 2050. To feed increasing world population, it is challenging task to increase about 70% global food productions. Food crops have significant contribution toward global food demand and food security. However, consequences from increasing heat stress events are demolishing their abilities to survive and sustain yield when subjected to extreme high temperature stress. Therefore, there is dire need to better understand response and tolerance mechanism of food crops following exposure to heat stress. Here, we aimed to provide recent update on impact of high temperature stress on crop yield of food crops, pollination, pollinators, and novel strategies for improving tolerance of food crop under high temperature stress. Importantly, development of heat-resistant transgenic food crops can grant food security through transformation of superior genes into current germplasm, which are associated with various signaling pathways as well as epigenetic regulation in response to extreme high temperature stress.

Eventos de estresse de alta temperatura são fatores críticos que inibem o rendimento das culturas. Enquanto isso, a população mundial está crescendo muito rapidamente e atingirá até 9 bilhões em 2050. Para alimentar a crescente população mundial, é uma tarefa desafiadora aumentar cerca de 70% da produção global de alimentos. As culturas alimentares têm uma contribuição significativa para a procura global de alimentos e a segurança alimentar. No entanto, as consequências do aumento de eventos de estresse por calor estão destruindo suas habilidades de sobreviver e manter a produção quando submetidos a estresse de alta temperatura. Portanto, há uma necessidade urgente de entender melhor o mecanismo de resposta e tolerância das safras de alimentos após a exposição ao estresse por calor. Aqui, nosso objetivo foi fornecer atualizações recentes sobre o impacto do estresse de alta temperatura no rendimento de culturas de alimentos, polinização, polinizadores e novas estratégias para melhorar a tolerância de culturas de alimentos sob estresse de alta temperatura. É importante ressaltar que o desenvolvimento de culturas alimentares transgênicas resistentes ao calor pode garantir segurança alimentar por meio da transformação de genes superiores em germoplasma atual, que estão associados a várias vias de sinalização, bem como à regulação epigenética em resposta ao estresse de alta temperatura extrema.

Response and tolerance mechanism of food crops under high temperature stress: a review

Abstract High temperature stress events are critical factors inhibiting crop yield. Meanwhile, world population is growing very rapidly and will be reached up to 9 billion by 2050. To feed increasing world population, it is challenging task to increase about 70% global food productions. Food crops have significant contribution toward global food demand and food security. However, consequences from increasing heat stress events are demolishing their abilities to survive and sustain yield when subjected to extreme high temperature stress. Therefore, there is dire need to better understand response and tolerance mechanism of food crops following exposure to heat stress. Here, we aimed to provide recent update on impact of high temperature stress on crop yield of food crops, pollination, pollinators, and novel strategies for improving tolerance of food crop under high temperature stress. Importantly, development of heat-resistant transgenic food crops can grant food security through transformation of superior genes into current germplasm, which are associated with various signaling pathways as well as epigenetic regulation in response to extreme high temperature stress.

Resumo Eventos de estresse de alta temperatura são fatores críticos que inibem o rendimento das culturas. Enquanto isso, a população mundial está crescendo muito rapidamente e atingirá até 9 bilhões em 2050. Para alimentar a crescente população mundial, é uma tarefa desafiadora aumentar cerca de 70% da produção global de alimentos. As culturas alimentares têm uma contribuição significativa para a procura global de alimentos e a segurança alimentar. No entanto, as consequências do aumento de eventos de estresse por calor estão destruindo suas habilidades de sobreviver e manter a produção quando submetidos a estresse de alta temperatura. Portanto, há uma necessidade urgente de entender melhor o mecanismo de resposta e tolerância das safras de alimentos após a exposição ao estresse por calor. Aqui, nosso objetivo foi fornecer atualizações recentes sobre o impacto do estresse de alta temperatura no rendimento de culturas de alimentos, polinização, polinizadores e novas estratégias para melhorar a tolerância de culturas de alimentos sob estresse de alta temperatura. É importante ressaltar que o desenvolvimento de culturas alimentares transgênicas resistentes ao calor pode garantir segurança alimentar por meio da transformação de genes superiores em germoplasma atual, que estão associados a várias vias de sinalização, bem como à regulação epigenética em resposta ao estresse de alta temperatura extrema.

Estimating biological reference intervals for cell blood counts in a dog population / Estimación de los intervalos biológicos de referencia para conteos celulares sanguíneos en una población de perros / Estimando intervalos de referência biológica para contagens de células sanguíneas em uma população de cães

Abstract Background: The results from automated equipment and peripheral blood smears allow correlating clinical data with cellular blood counts (CBC), generating information on pathologies of hematological and non-hematological origin in dogs. Objective: To describe qualitative and quantitative magnitudes of CBC in healthy donor dogs of a blood- bank in Medellín (Colombia). Methods: A descriptive-prospective study was carried out from 146 records of CBC results from a blood-bank. The samples were processed by automated equipment, and trained personnel performed the observation of peripheral blood smears to collect qualitative information. Variables such as age, sex, breed, quantitative results, and observations of the peripheral blood smears were considered. For the definition of biological intervals (BIs), the mean and two standard deviations were used for the data with a normal distribution. Otherwise, the 2.5th and 97.5th percentiles were used. Results: The size, granularity, and cytoplasmic vacuoles in monocytes and polymorphonuclear eosinophils, as well as the presence of Barr chromatin and occasional circulating erythroblasts, were remarkable findings to the peripheral blood smear. With the standardization of data obtained from dogs of large and giant breeds, the present work provides BIs for some of the CBC data in the studied population. Conclusion: The findings of the present study allow approximations to the definition of alterations in blood cells and their counts, which can guide the veterinarian towards an early diagnosis in dogs.

Resumen Antecedentes: Los datos obtenidos de equipos automatizados y extendidos de sangre periférica permiten correlacionar la clínica y los resultados del hemograma, generando información de interés sobre patologías de origen hematológico y no hematológico en perros. Objetivo: Describir las magnitudes cualitativas y cuantitativas del hemograma en perros sanos, donantes de un banco de sangre en Medellín (Colombia). Métodos: Se realizó un estudio descriptivo-prospectivo a partir de 146 registros de resultados de hemograma remitidos por un banco de sangre. Las muestras fueron procesadas por un equipo automatizado y personal entrenado realizó la observación del extendido de sangre periférica para la colección de información de corte cualitativo. Variables como edad, sexo, raza, resultados cuantitativos de las muestras y observaciones al extendido de sangre periférica fueron consideradas. Para la definición de intervalos biológicos (IBs) se utilizaron la media y dos desviaciones estándar para los datos con distribución normal. De lo contrario, se utilizaron los percentiles 2,5 y 97,5. Resultados: El tamaño, granularidad y vacuolas citoplasmáticas en monocitos y polimorfonucleares eosinófilos, así como la presencia de Cromatina de Barr y eritroblastos circulantes ocasionales fueron hallazgos llamativos al extendido de sangre periférica. Con la normalización de los datos para caninos de razas grandes y gigantes, el presente trabajo aporta IBs para algunos de los datos del hemograma en la población estudiada. Conclusión: Los hallazgos del presente estudio permiten aproximaciones a la definición de alteraciones en las células hemáticas y sus conteos, que pueden orientar al médico veterinario hacia un diagnóstico temprano en perros.

Resumo Antecedentes: As informações obtidas de equipamentos automatizados e esfregaços de sangue periférico permitem correlacionar os resultados clínicos e de hemogramas, gerando informações interessantes sobre patologias de origem hematológica e não hematológica em cães. Objetivo: Descrever as magnitudes qualitativa e quantitativa do hemograma em cães saudáveis, doadores de um banco de sangue em Medellín (Colômbia). Métodos: Foi realizado um estudo descritivo-prospectivo a partir de 146 registros de resultados de hemograma encaminhados por um banco de sangue. As amostras foram processadas por uma equipe automatizada e pessoal treinado observou o esfregaço de sangue periférico para a coleta de informações qualitativas. Foram consideradas variáveis como idade, sexo, raça, resultados quantitativos das amostras e observações do esfregaço de sangue periférico. Para a definição de intervalos biológicos (IBs), foram utilizados a média e dois desvios-padrão para os dados com distribuição normal. Caso contrário, foram utilizados os percentis 2,5 e 97,5. Resultados: O tamanho, a granularidade e os vacúolos citoplasmáticos dos monócitos e das células polimorfonucleares dos eosinófilos, bem como a presença da cromatina de Barr e ocasionais eritroblastos circulantes foram achados marcantes na disseminação do sangue periférico. Com a normalização dos dados para cães de raças grandes e gigantes, o presente trabalho fornece IBs para alguns dos dados de hemograma na população estudada. Conclusão: Os achados do presente estudo permitem aproximações à definição de alterações nas células sanguíneas e suas contagens, o que pode orientar o médico veterinário responsável pelo diagnóstico precoce em cães.

Trampas extracelulares de neutrófilos en sepsis / Neutrophil extracellular traps in sepsis / Armadilhas extracelulares de neutrófilos na sepse

Resumen: Introducción: Los neutrófilos son uno de los componentes celulares más importantes de la inmunidad innata, debido a que estas células se reclutan rápidamente a los sitios de infección y pueden eliminar patógenos por múltiples métodos. En diferentes entidades, de entre las que se destaca la sepsis, los neutrófilos mejoran sus propiedades antimicrobianas mediante la liberación de trampas extracelulares de neutrófilos (TEN), constituidas por cromatina, histonas y proteínas granulares, proceso que es conocido por NETosis. Objetivo: El objetivo de esta revisión es examinar los conceptos actuales, relacionados con los mecanismos subyacentes de la formación de TEN y su impacto en sepsis. Conclusión: La desregulación de la NETosis causada por sepsis puede tener efectos deletéreos en sepsis, destacando inflamación, trombosis y disfunción multiorgánica.

Abstract: Introduction: Neutrophils are one of the most important cellular components of innate immunity because these cells are rapidly recruited to sites of infection and can eliminate pathogens by multiple methods. In different entities from which sepsis disables neutrophils improve their antimicrobial properties by releasing neutrophils extracellular traps (NET), constituted by chromatin, histones and granular proteins, a process that is known by NETosis. Objective: The objective of this paper is to review current concepts related to the underlying mechanisms of the formation of NETs, as well as the beneficial and harmful effects of them. Conclusions: The dysregulation of NETosis caused by sepsis can have detrimental effects that cause inflammation, thrombosis and multi-organ failure.

Resumo: Introdução: Os neutrófilos são um dos componentes celulares mais importantes da imunidade inata, porque essas células se recrutam rapidamente para locais de infecção e podem matar patógenos por vários métodos. Em diferentes entidades das quais se destaca a sepse, os neutrófilos melhoram suas propriedades antimicrobianas liberando as armadilhas extracelulares de neutrófilos (del inglés: neutrophil extracelular traps, NET), compostas por cromatina, histonas e proteínas granulares, um processo conhecido como NETosis. Objetivo: O objetivo desta revisão é revisar os conceitos atuais relacionados aos mecanismos subjacentes à formação das NET e seu impacto na sepse. Conclusão: A desregulação da NETosis causada pela sepse pode ter efeitos deletérios na sepse, destacando inflamação, trombose e disfunção de múltiplos órgãos.

Fragmentación del ADN espermático en parejas tratadas por fertilización in vitro / Sperm DNA fragmentation in couplestreated by in vitro fertilization

RESUMEN Introducción: Se estudian los factores que afectan el ADN espermático en la actualidad y en qué medida influyen en la aplicación de las técnicas de reproducción asistida de alta tecnología. La fertilización in vitro es un tema de interés que ha motivado a muchos investigadores. Objetivo: Determinar la relación que existe entre el índice de fragmentación del ADN de la cromatina espermática y los resultados de la técnica de fertilización in vitro en parejas infértiles. Métodos: Se realizó un estudio descriptivo transversal en 107 parejas infértiles remitidas del Programa Nacional de Atención a la pareja infértil, donde se precisó la asociación entre el potencial fertilizante y las variables de resultados: tasa de fertilización, calidad embrionaria y embarazo. Se estudiaron, además, algunos factores que pueden influir en el grado de fragmentación del ADN. Resultados: El potencial fertilizante no se relacionó con la tasa de fertilización, ni con el embarazo clínico, pero sí con la calidad embrionaria (P= 0.036). La edad paterna resultó ser estadísticamente significativa en relación con el potencial fertilizante (P= 0.032). La presencia de varicocele se asoció con el bajo potencial fertilizante (OR= 5,27; IC 95 por ciento [1.34 - 24.09]). Conclusiones: El índice de fragmentación del ADN de la cromatina espermática afecta negativamente la calidad de los embriones a transferir. La edad y el varicocele se relacionan positivamente con el grado de fragmentación del ADN espermático. El consumo de alcohol, el hábito de fumar y la exposición a agentes físicos y químicos no se relacionaron con el índice de fragmentación del ADN espermático en este estudio(AU)

ABSTRACT Introduction: The factors that affect the spermatic DNA are being studied at present and in what extent they affect the implementation of high technology assisted reproduction techniques. In vitro fertilization is a topic of interest that has motivated many researchers. Objective: To determine the relationship between the rate of DNA fragmentation of sperm chromatin and the results of in vitro fertilization technique in infertile couples. Methods: A descriptive cross-sectional study was conducted in 107 infertile couples referred to the National Program of Attention to the Infertile Couple, where it was specified the association between the potential fertilizer and outcome variables: rate of fertilization, embryo quality and pregnancy. In addition, there were studied some factors that may influence the degree of DNA fragmentation. Results: The fertilizing potential was not related to the rate of fertilization, or with the clinical pregnancy, but it did with the embryo quality (p= 0.036). The paternal age proved to be statistically significant in relation to the fertilizing potential (p= 0.032). The presence of varicocele was associated with the low fertilizing potential (OR = 5.27; CI 95 percent [1.34 - 24.09]). Conclusions: The rate of DNA fragmentation of sperm chromatin negatively affects the quality of the embryos to be transferred. The age and varicocele are positively related with the degree of sperm DNA fragmentation. The consumption of alcohol, the smoking habit and the exposure to chemical and physical agents were not associated with the rate of sperm DNA fragmentation in this study(AU)

Dengue virus infection induces chromatin remodeling at locus AAEL006536 in the midgut of Aedes aegypti / La infección por virus dengue induce remodelación de la cromatina en el locus AAEL006536 en el intestino medio de Aedes aegypti

Abstract: Objective: To identify and characterize Aedes aegypti's AAEL006536 gene proximal upstream cis-regulatory sequences activated by dengue virus infection. Materials and methods: A. aegypti Rockefeller strain mosquitoes were blood fed or infected with dengue virus 2. Open chromatin profiling was then carried out in pools of midguts from each group of mosquitoes. Results: The proximal upstream region does not contain open chromatin sites in the midguts of blood-fed mosquitoes as detected by FAIRE-qPCR. In contrast, two cis-regulatory sites were identified in the same upstream region of dengue virus-infected mosquito midguts. The distal sequence contains STAT-, REL- and C/EBP-type transcription factor binding sites. Conclusion: The activation of two proximal cis-regulatory sequences, induced by dengue virus infection, is mediated by chromatin remodeling mechanisms. Binding sites suggest a dengue virus infection-induced participation of immunity transcription factors in the up-regulation of this gene. This suggests the participation of the AAEL006536 gene in the mosquito's antiviral innate immune response.

Resumen: Objetivo: Identificar y caracterizar las secuencias reguladoras activadas por la infección por virus dengue en la región proximal del gen AAEL006536 de Aedes aegypti. Material y métodos: Mosquitos de la cepa Rockefeller de A. aegypti se infectaron con virus dengue o se alimentaron con sangre. Se obtuvieron los perfiles de cromatina abierta del locus en los intestinos de cada uno de los grupos. Resultados: Se identificaron dos sitios reguladores solo en los intestinos de mosquitos infectados por virus dengue. El sitio distal contiene sitios de unión a factores de transcripción tipo REL, STAT y C/EBP. Conclusiones: La activación de dos sitios reguladores proximales está mediada por la remodelación de la cromatina. Los sitios de unión a factores de transcripción en el sitio regulador distal sugieren la participación de las vías de inmunidad en la regulación del gen. Esto sugiere la participación de este gen en la respuesta inmune del mosquito frente a la infección viral.

[The value of immunohistochemistry using SMARCA4/BRG1 in the diagnosis of small cell ovarian carcinoma hypercalcemic type. A report of two cases]. / Valor de la determinación inmunohistoquímica de SMARCA4/BRG1 en el diagnóstico del carcinoma de ovario de célula pequeña variante hipercalcémica. Presentación de dos casos.

Small cell carcinoma of ovary-hypercalcemic type is an undifferentiated carcinoma. We describe two cases in women aged 32 and 29. Both presented with large masses and complete surgical extirpation was impossible. Histologically, the images were similar, with diffuse cell proliferation, accompanied by the presence of follicle-like spaces. In both cases it was necessary to make a differential diagnosis with entities such as adult or juvenile granulosa cell tumour, small cell carcinoma of pulmonary type, dysgerminoma and even peripheral neuroectodermal tumour. The absence of SMARCA4/BRG1 immunostaining proved very useful in the diagnosis of hypercalcemic small cell ovarian carcinoma.

Role of the CHD7 chromatin remodeler protein in glioblastoma multiformePalavras-chave em inglês Cell motility / Papel do remodelador de cromatina CHD7 em glioblastoma multiforme

Chromatin remodeler proteins exert an important function in promoting dynamic modifications in the chromatin architecture, rendering the transcriptional machinery available to the condensed genomic DNA. Due to this central role in regulating gene transcription, deregulation of these molecular machines may lead to severe perturbations in the normal cell functions. Loss-of-function mutations in the CHD7 gene, a member of the chromodomain helicase DNA-binding (CHD) family, are the major cause of the CHARGE syndrome in humans. The disease is characterized by a variety of congenital anomalies, including malformations of the craniofacial structures, peripheral nervous system, ears, eyes and heart. In this context, several studies have already shown the importance of CHD7 for proper function of the neural stem cells (NSCs). Interestingly, we found that CHD7 mRNA levels are upregulated in gliomas, when compared to normal brain tissue, therefore, we hypothesized that CHD7 might have a role in the pathogenesis of these tumors. To investigate the possible oncogenic role of CHD7 in glioblastoma (GBM), we adopted gain- and loss-of-function approaches in adherent GBM cell lines. Using CRISPR_Cas9 genome editing, we found that CHD7 deletion suppresses anchorage-independent growth and reduces spheroid invasion in human LN-229 cells. Moreover, deletion of CHD7 delayed tumor growth and improved overall survival in an orthotopic xenograft glioma mouse model. Conversely, ectopic overexpression of CHD7 in LN-428 and A172 cells was found to increase cell motility and invasiveness in vitro and LN-428 tumor growth in vivo. RNAseq analysis showed that alterations of CHD7 expression levels promote changes in several molecular pathways and modulate critical genes associated with cell adhesion and locomotion. However, the mechanisms underlying the effects of CHD7 overexpression in glioma tissue are still not understood. Here, we also generated recombinant plasmid with functional CHD7 promoter activity reported by luciferase assay. This powerful tool should enable future studies to determine the direct targeting relationship between different signal transduction pathways and CHD7 geneexpression. In summary, our findings indicate that GBM cells expressing a high level of CHD7 may exist and contribute to tumor infiltration and recurrence. Further studies should warrant important clinical-translational implications of our findings for GBM treatment

As proteínas remodeladoras de cromatina exercem importante papel, promovendo modificações dinâmicas na arquitetura da cromatina e dando acesso à maquinaria transcricional ao DNA genômico condensado. Devido à esta função central na regulação da transcrição gênica, a desregulação dessas máquinas moleculares pode levar a perturbações graves na função normal das células. Assim, por exemplo, mutações do tipo perda de função no gene CHD7, um membro da família "chromodomain helicase DNA-binding" (CHD), são a principal causa da síndrome de CHARGE em humanos. A doença é caracterizada por uma variedade de anomalias congênitas, incluindo malformações das estruturas craniofaciais, sistema nervoso periférico, orelhas, olhos e coração. Neste contexto, vários estudos já mostraram a importância da proteína CHD7 para o funcionamento normal de células-tronco neurais (NSCs). Curiosamente, descobrimos que os níveis de mRNA de CHD7 estão mais fortemente expressos em gliomas, quando comparados ao tecido cerebral normal, portanto, nós hipotetizamos que CHD7 poderia ter um papel na patogênese desses tumores. Para investigar o possível papel oncogênico de CHD7 em glioblastoma (GBM), utilizamos enfoques de ganho e perda de função em linhagens celulares aderentes de GBM. Utilizando a técnica de CRISPR_Cas9 para edição do genoma, demonstramos que a deleção do gene CHD7 suprime o crescimento independente de ancoragem e reduz a invasão de esferóides em células LN-229 humanas de GBM. Além disso, a deleção de CHD7 reduziu o crescimento do tumor e melhorou a sobrevida em modelo de injeção ortotópica xenográfica em camundongo. Por outro lado, verificou-se que a super-expressão ectópica de CHD7 nas células LN-428 e A172 aumenta não só a motilidade celular e a capacidade de invasão in vitro, mas, também, o crescimento do tumor de LN-428 in vivo. A análise de RNA-seq mostrou que o nocauteamento da sequência codificadora de CHD7 e sua super-expressão promovem alterações em diversas vias moleculares, modulando genes críticosassociados à adesão e locomoção celular. No entanto, os mecanismos subjacentes aos efeitos da super-expressão de CHD7 em tecidos de glioma ainda não são compreendidos. Neste trabalho, geramos um plasmídeo recombinante contendo um fragmento da região promotora de CHD7, o qual se mostrou funcional em ensaios de luciferase. Esta ferramenta permitirá que estudos futuros possam identificar a relação direta entre as diferentes vias de transdução de sinal e a expressão do gene CHD7. Em resumo, nossos achados indicam que células de GBM expressando um alto nível de CHD7 podem existir e contribuir para a infiltração e recorrência do tumor. Estudos posteriores deverão avaliar as possíveis implicações dos resultados apresentados neste trabalho para a translação clínica no tratamento de pacientes com GBM

Caracterización funcional y estructural de genes asociados a preeclampsia expresados en la placenta humana / Structural and functional characterization of genes associated with preeclampsia expressed in human placenta / Caracterização estrutural e funcional de genes associados à pré-eclâmpsia expressaram em humanos placenta

Introducción: La preeclampsia continúa siendo la primera causa de morbimortalidad perinatal. El conocimiento sobre su etiología molecular se ha incrementado en los últimos años debido al avance en la aplicación de las ciencias "ómicas". Ello ha llevado a identificar genes candidatos que participarían en su patogénesis. Objetivo: Identificar y caracterizar estructural y funcionalmente genes expresados en placenta que se asocian con preeclampsia. Métodos: A partir de una revisión de literatura de los últimos diez años, se identificaron 16 genes cuya expresión en placenta estaba asociada con la patología. Se realizó la minería de datos incluyendo las siguientes variables: número de genes, tamaño de los genes, número de exones codificantes, islas CpG y las familias de los diferentes elementos repetidos en una ventana de 100Kbp. Mediante un análisis bioinformático, usando los diferentes recursos del NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov) y del Genome Browser de UCSC (http://genome.ucsc.edu/). Adicionalmente se usó el portal BioGPS (http://biogps.gnf.org/#goto=welcome) se determinaron los niveles de expresión de cada gen por tejidos. Resultados: Se registraron diferencias en la cromatina que contiene las familias de elementos no codificantes de los genes asociados en comparación con los controles (Prueba de Kruskall-Wallis, P= 0.0341824). Los genes LEP, EBI3, PROCR, FSTL3, HEXB, INHBA y ENG fueron los que registraron el mayor puntaje z en placentas preeclámpsicas. Conclusión:La aplicación de las herramientas bioinformáticas se convierte en un instrumento potente para el análisis integrado de la expresión de genes y su papel en la patogénesis de la PE. Esto conllevaría a la identificación temprana de mujeres afectadas.

Introduction: Preeclampsia still is the main cause of perinatal morbi-mortality; due to the advance in the application of the omics sciences the knowledge about its molecular etiology has increased in the last years, this has led to the identification of candidate genes, which would be involved in its pathogenesis. Objective: To identify those genes, expressed in placenta that are associated with preeclampsia and compare their structural and functional characteristics. Methods: From a literature review, 16 genes were found, whose expression in placenta was associated to the pathology. Data mining was performed including the following genomic variables: number of genes, genomic size, coding exon count, CpG islands and repeat elements in a 100Kbp window. For the Bioinformatics analysis, we used different resources of the NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov) and the UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu/). Furthermore, the portal BioGPS (http://biogps.gnf.org/#goto=welcome) Was used to determine the expression levels of each gene per tissue. Results: Significant differences were found for the non-coding elements of the chromatin in that associated genes, in comparison with controls (Kruskall-Wallis test, P= 0.0341824). The genes LEP, EBI3, PROCR, FSTL3, HEXB, INHBA and ENG were the ones with the highest z- score values in preeclampsic placenta. Conclusion: The application of computational tools has become a powerful instrument for the integrated analysis of gene expression and its role in the pathogenesis of PE. This would lead to an early detection of affected women.

Introdução: A pré-eclâmpsia ainda é a principal causa perinatal Morbi-mortalidade; devido ao avanço na aplicação das ciências "ómicas" o conhecimento sobre sua etiologia molecular tem aumentado nos últimos anos, Isto levou à identificação de genes candidatos, que estariam envolvidos na sua Patogênese. Objetivo: Para identificar esses genes, Expresso em placenta que está associada à pré-eclâmpsia e comparar as suas características estruturais e funcionais. Métodos: A partir de uma revisão da literatura, foram encontrados 16 genes, cuja expressão na placenta foi asociada à patología. Extração de dados Foi realizada incluindo as seguintes variáveis genómicas: Número de genes, tamanho genômico, exon contagem de codificação, CpG ilhas e repetir elementos em uma janela de 100Kbp. Para a análise bioinformática, Utilizamos diferentes recursos do NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov) e do UCSC Genome Browser (http://genome.ucsc.edu/). Além disso, o portal BioGPS (http://biogps.gnf.org/#goto=welcome) foi utilizado para determinar os níveis de expressão de cada gene por tecido. Resultados: Se encontrou diferenças significativas para os elementos não codificantes da cromatina nos genes associados, Em comparação com os controlos (teste de Kruskall-Wallis, P = 0,0341824). Os genes LEP, EBI3, PROCR, FSTL3, HEXB, INHBA e ENG foram os que apresentaram os maiores valores de z-score na placenta pré-eclâmpsica. Conclusão: A aplicação de ferramentas computacionais tornou-se um poderoso instrumento para a análise integrada da expressão gênica e seu papel na patogênese da PE. Isso levaria a uma detecção precoce das mulheres afetadas.

Impaired protamination and sperm DNA damage in a Nellore bull with high percentages of morphological sperm defects in comparison to normospermic bulls / Deficiências de protaminação e danos de DNA no sêmen de um touro Nelore com elevada porcentagem de patologias espermáticas em comparação a touros normospérmicos

The routine semen evaluation assessing sperm concentration, motility and morphology, does not identify subtle defects in sperm chromatin architecture. Bulls appear to have stable chromatin, with low levels of DNA fragmentation. However, the nature of fragmentation and its impact on fertility remain unclear and there are no detailed reports characterizing the DNA organization and damage in this species. The intensive genetic selection, the use of artificial insemination and in vitro embryo production associated to the cryopreservation process can contribute to the chromatin damage and highlights the importance of sperm DNA integrity for the success of these technologies. Frozen-thawed semen samples from three ejaculates from a Nellore bull showed high levels of morphological sperm abnormalities (55.8±5.1%), and were selected for complementary tests. Damage of acrosomal (76.9±8.9%) and plasma membranes (75.7±9.3%) as well as sperm DNA strand breaks (13.8±9.5%) and protamination deficiency (3.7±0.6%) were significantly higher compared to the values measured in the semen of five Nellore bulls with normospermia (24.3±3.3%; 24.5±6.1%; 0.6±0.5%; 0.4±0.6% for acrosome, plasma membrane, DNA breaks and protamine deficiency, respectively) (P<0.05). Motility and percentage of spermatozoa with low mitochondrial potential showed no differences between groups. This study shows how routine semen analyses (in this case morphology) may point to the length and complexity of sperm cell damage emphasizing the importance of sperm function testing.(AU)

O exame de rotina de sêmen, o qual avalia a concentração de espermatozoides, a motilidade e a morfologia, pode não identificar defeitos sutis na arquitetura da cromatina de espermatozoides. Os touros parecem ter cromatina estável com baixos níveis de fragmentação do DNA. No entanto, a natureza da fragmentação e o seu impacto sobre a fertilidade ainda não estão claros e não há relatos que caracterizam a organização do DNA e os danos nessa espécie com mais detalhes. A seleção genética intensiva e o uso da inseminação artificial e da produção in vitro de embriões, além do processo de criopreservação, podem contribuir para o dano da cromatina, e sabe-se a importância da integridade do DNA espermático para o sucesso dessas tecnologias. Amostras de sêmen de três ejaculados de um touro Nelore com altos níveis de alterações morfológicas (55,8±5,1%) foram selecionadas para realização de exames complementares. Os danos de acrossoma (76,9±8,9%) e das membranas plasmáticas (75,7±9,3%), bem como quebras de fita de DNA de espermatozoides (13,8±9,5) e deficiência de protamina (3,7±0,6) foram significativamente maiores em comparação aos valores avaliados no sêmen de cinco touros Nelore com normospermia (24,3±3,3%; 24,5±6,1%; 0,6±0,5%; 0,4±0,6% para acrossoma, membrana plasmática, quebras de DNA e deficiência de protamina, respectivamente) (p<0,05). Motilidade e porcentagem de espermatozoides com baixo potencial mitocondrial não diferiram estatisticamente. Essas avaliações mostram que análises de sêmen de rotina (neste caso, morfologia) podem apontar para a extensão e a complexidade dos danos na célula espermática, o que indica que a deficiência de protamina e os danos no DNA podem ocorrer simultaneamente a defeitos morfológicos. Tal ocorrência enfatiza a importância das análises de sêmen clássicas e dos testes complementares.(AU)

Efecto in vitro del pentóxido de vanadio (V2O5) sobre la calidad espermática / In vitro effect of vanadium pentoxide (V2O5) on sperm quality

El vanadio es un metal pesado considerado como un contaminante ambiental, producto de la manipulación antropogénica, que incide sobre el potencial reproductivo masculino, especialmente sobre la movilidad espermática. Esta investigación tuvo como objetivo determinar el efecto in vitro del pentóxido de vanadio sobre la calidad espermática. Se incubaron suspensiones de espermatozoides humanos por 24 horas bajo concentraciones de 0, 1 y 2 ppm V2O5, se realizó la valoración de la movilidad y vitalidad espermática, la integridad de membrana, la reacción acrosómica y la integridad de la cromatina espermática. El V2O5 alteró de manera significativa la movilidad espermática, específicamente los patrones de movilidad espermática moderado (p < 0.01), lento (p = 0.01) e inmóvil (p < 0.01). Los grupos tratados con V2O5 presentaron un porcentaje de espermatozoides vivos significativamente mayor al grupo control (p < 0.01). La integridad de membrana y reacción acrosómica no resultaron afectadas por la exposición de espermatozoides humanos a V2O5 (p > 0.05). De igual modo, no se observaron alteraciones del material nuclear (p > 0.05). El vanadio es capaz de alterar la movilidad y vitalidad espermática sin inducir cambios sobre la integridad de membrana y la cromatina espermática.

Vanadium is a heavy metal considered an environmental pollutant product of anthropogenic manipulation; it influences the masculine reproductive potential, especially the sperm motility. This research had the objective of determining the effect of vanadium pentoxide on sperm quality in vitro. Spermatozoa were incubated for 24 hours under 0, 1 and 2 ppm V2O5 concentrations, and sperm motility and vitality, membrane integrity, acrosome reaction and sperm chromatin integrity were assessed. V2O5 altered sperm motility in a significant way, specifically moderated (p < 0.01), slow (p = 0.01), and non motile (p < 0.01) sperm motility patterns. The groups treated with V2O5 had a major percentage of live spermatozoa than the control group (p < 0.01). Membrane integrity and acrosome reaction were not affected by human sperm exposition to V2O5 (p > 0.05). Similarly, we did not observe nuclear material alterations. Vanadium is able to alter sperm motility and viability without inducing changes on membrane and chromatin integrity.

Dental pulp fibroblast and sex determination in controlled burial conditions / Fibroblastos de la pulpa dental y la determinación del sexo en condiciones controladas de enterramiento

The need to identify bodies that are found as a result of disappearances with a diversity of causes, illegal burials and massive disasters, represent a wide percentage of dentistry practice on forensic research. The following study determined the performance of Barr Body Test, in fibroblasts of healthy teeth, under different conditions of burial (in vitro) with variations in pH, humidity and salinity in terms of general accuracy and sensitivity for men and women. Analyzed sample considered 47 dental pulps, taken from teeth under burial conditions during a period of a month. From dental pulps samples, 265 histological cuts valid for this study, were obtained, which were observed with an optical microscope under conventional H/E staining. Results showed a 98.9% of well-diagnosed cases, which correspond to the overall accuracy of the method. Sensitivity for men was 97.5% and 100% for women, over the analyzed sample. In low humidity conditions, 3 samples of badly diagnosed cases in men were observed, with a group accuracy of a 90%, with a sensitivity of 25% for men and 100% for women. The present study establishes that based on these results, the performance of Barr Body Test in fibroblasts, proposed for healthy pulp teeth, is not affected by burial conditions in terms of pH (acid-alkaline), salinity (high-low) and high humidity.

La necesidad de identificar cuerpos que resultan como consecuencia de desapariciones de causas variadas, inhumaciones ilegales y desastres masivos representa un porcentaje amplio en el quehacer odontológico en un escenario de investigación forense. El presente estudio determinó el rendimiento de la prueba diagnóstica de observación del cuerpo de Barr en células de la pulpa de dientes sanos, sometidos a distintas condiciones de enterramiento (in vitro) con variación de pH, humedad y salinidad en términos de exactitud general y sensibilidad para hombres y mujeres. La muestra analizada consideró 47 pulpas dentales, extraídas de dientes sometidos a condiciones de enterramiento durante un mes. De las pulpas dentarias se obtuvieron 265 cortes histológicos válidos para el estudio, los cuales mediante la tinción convencional H/E, fueron observados al microscopio óptico. Los resultados arrojaron un 98,9% de casos bien diagnosticados, que correspondió a la exactitud general del método. La sensibilidad para hombres fue de 97,5% y para mujeres de 100% sobre el total de la muestra analizada. Las condiciones de pH (ácido y alcalino), salinidad (alta y baja) y alta humedad presentaron una exactitud de grupo de 100%, con una sensibilidad para hombres y mujeres de 100%. En la condición de baja humedad se observaron 3 muestras de hombres mal diagnosticadas con una exactitud de grupo de 90% y sensibilidad para hombres de 25% y para mujeres de 100%. A la luz de los resultados, el presente estudio establece que el rendimiento de la prueba diagnóstica de observación del cuerpo de Barr en fibroblastos, propuesto para pulpas de dientes sanos, no se afecta con las condiciones de enterramiento propuestas bajo pH ácido ­ alcalino, salinidad alta ­ baja y humedad alta.

Estudo da cromatina nos sítios de fixação à matriz nuclear no domínio do gene TP53 e das modificações epigenéticas e no modelo de progressão tumoral mamária 21T / MARs chromatin study on TP53 gene domain and epigenetic modifications in a breast cancer progression model

Dentre os diversos tipos de câncer agressivos, o câncer de mama é o mais comum em mulheres. Mutações hereditárias e adquiridas, assim como alterações epigenéticas atuam em sinergia na carcinogênese mamária e na progressão tumoral. A proteína P53 é uma supressora de tumor e possui uma atuação fundamental na integridade genômica. Apesar do vasto conhecimento sobre o controle da P53 a nível de proteína, ainda pouco se sabe sobre o controle transcricional do gene TP53. A série 21T, uma série de 4 linhagens celulares originadas da mama da mesma paciente, representando diferentes estágios de progressão tumoral mamária, é um eficiente modelo para investigação das alterações epigenéticas e suas influências na expressão gênica ao longo da progressão do câncer de mama. Nós analisamos a organização do domínio do gene TP53 através da técnica de arranjo de DNA, em diversas linhagens celulares de câncer de mama e linhagens controle, e realizamos uma tentativa de caracterizar estes elementos de DNA nas linhagens controle não-tumorais HB2 e MCF10A e nas tumorais MCF-7, MDA-MB-231, T47D, através dos marcadores epigenéticos de eucromatina, H4Ac, e heterocromatina, H3K9me3. Ainda analisamos a ligação de proteínas à região associada à matriz nuclear (MAR), denominada MAR 2, e a possível ligação da proteína ligante à matriz nuclear (MARBP), PARP-1, através de ensaios de gel shift (EMSA). Detectamos que na linhagem controle epitelial mamária, HB2, o gene TP53 está posicionado num domínio de DNA relativamente pequeno, aproximadamente 50 kb, delimitado por dois sítios de fixação à matriz nuclear. Interessantemente, esta estrutura de domínio se apresentou radicalmente diferente nas linhagens de câncer de mama estudadas, MCF7, T47D, MDA-MB-231 e BT474, nos quais o tamanho do domínio estudado estava aumentado e a transcrição do TP53 diminuída...

Breast cancer is the most common aggressive cancer type in women. Inherited and acquired mutations as well as epigenetic alterations act together in breast carcinogenesis and tumor progression. P53 is a tumor suppressor protein critical for genome integrity. Although its control at the protein level is well known, the transcriptional regulation of the TP53 gene is still unclear. The 21T series, a series of 4 breast cell lines originating from the same patient and representative of the breast tumor progression stages, is a suitable model to investigate epigenetic alterations and their influences upon gene expression during breast tumor progression. We have analyzed the organization of the TP53 gene domain using DNA arrays in several breast cancer and control cell lines and we made an attempt to characterize these DNA elements in breast non-cancerous cell lines HB2 and MCF-10, and cancerous MCF-7, MDA-MB-231 and T47D, through the determination of epigenetic markers of euchromatin, H4Ac, and heterochromatin, H3K9me3. We further analyzed the matrix attachment region (MAR), named MAR 2, protein binding, and possible MAR 2 binding of the important MAR binding protein (MARBP), PARP-1, by Electrophoretic mobility Shift Assay (EMSA). We have found that in the control breast epithelial cell line, HB2, the TP53 gene is positioned within a relatively small DNA domain, encompassing 50 kb, delimited by two nuclear matrix attachment sites. Interestingly, this domain structure was found to be radically different in the studied breast cancer cell lines, MCF7, T47D, MDA-MB-231 and BT474, in which the domain size was increased and TP53 transcription was decreased...

Influence of stages anestrous and diestrus in chromatin configuration in germinal vesicle of canine oocytes / Influência das fases de anestro e diestro sobre a configuração da cromatina em vesícula germinativa de oócitos caninos

In canine specie, oocyte maturation rates are low and the percentage of oocytes that remain in the stage of germinal vesicle (GV) regardless of culture conditions is high. During maturation oocyte undergoes modification and the GV chromatin remodeling manifested by changes in the configuration and positioning. The objective of this work is to evaluate the configuration and positioning of chromatin of oocytes in GV stage during anestrus and diestrus bitches. The ovaries of 33 females (20 bitches in anestrous and 13 in diestrus) were isolated, sliced and only cumulus-oocyte complexes (COCs) grade 1 were subjected to solution of 0.2% hyaluronidase for release in cumulus cells. After this process, the selected oocytes were stained and evaluated. From a total of 920 oocytes, 566 were classified as grade 1 and the stages of chromatin configuration identified as GV-1, GV-2, GV-3 and GV-4. The observed changes in chromatin configuration been characterized as a transition dispersed chromatin (GV-1, GV-2) for partially condensed (GV-3) until it reaches a fully condensed stage (GV-4). The data analyzed from the chromatin configuration showed a significant difference between the stages with a higher proportion of GV-1 and GV-2 for the anoestrus and GV-3 and GV-4 during diestrus. There is need for further studies to be able to have a proper understanding of the influence of chromatin configuration of oocytes in GV stage in resumption of meiosis and consequently in oocyte meiotic competence...

Na espécie canina as taxas de maturação oocitária são baixas e a porcentagem de oócitos que permanecem em estagio de vesícula germinativa (VG), independente das condições de cultivo, e alta. Durante a maturação oocitária, a VG sofre modificação e remodelamento da cromatina, que se manifesta por alterações na sua configuração e posicionamento. Assim, o objetivo deste trabalho e avaliar a configuração e o posicionamento da cromatina de oócitos em estagio de VG durante o anestro e diestro de cadelas. Os ovários de 33 fêmeas (20 cadelas em anestro e 13 em diestro) foram isolados, fatiados e os complexos cumulus-oócitos (COCs) foram submetidos à solução de hialuronidase 0,2% para a liberação das células do cumulus. Apos esse processo, os oócitos selecionados foram corados, avaliados e apenas COCs grau 1 foram utilizados. De um total de 920 oócitos, 566 foram classificados como grau 1 e os estágios de configuração da cromatina identificados como VG-1, VG-2, VG-3 e VG-4. As alterações observadas na configuração da cromatina foram caracterizadas como transição de uma cromatina dispersa (VG-1, VG-2) para parcialmente condensada (VG-3) ate atingir um estagio totalmente condensado (VG-4). Os dados analisados da configuração da cromatina mostraram uma diferença significativa entre as fases de anestro e diestro, com maior proporção de VG-1 e VG-2 durante o anestro e de VG-3 e VG-4 durante o diestro. Ha necessidade de novos estudos para uma compreensão adequada da influencia da configuração da cromatina de oócitos no estagio de VG na retomada da meiose e na competência meiótica do oócito...

Desempenho diagnóstico e associações clínicas dos anticorpos contra componentes da cromatina no lúpus eritematoso sistêmico juvenil / Diagnostic performance and clinical associations of antibodies to the chromatin antigenic system in juvenile systemic lupus erythematosus

OBJETIVOS: Determinar a frequência de anticorpos contra componentes da cromatina no lúpus eritematoso sistêmico juvenil (LESJ) e correlacionar a presença desses autoanticorpos com manifestações clínicas e atividade da doença. MÉTODOS: Os anticorpos anticromatina (anti-CHR), antinucleossomo (anti-NCS) e anti-dsDNA foram medidos em 175 indivíduos, incluindo 37 pacientes com LESJ ativo e 41 com doença inativa, 47 com doenças autoimunes não lúpicas, e 50 crianças saudáveis. Um teste ELISA in house foi desenvolvido com nucleossomos purificados a partir de timo de bezerro para determinar os anticorpos IgG e IgG3 anti-NCS. Anti-CHR e anti-dsDNA foram detectados por kits comerciais de ELISA (INOVA). RESULTADOS: Anticorpos anti-NCS e anti-CHR exibiram não só uma alta especificidade para LESJ, mas também uma frequência semelhante em LESJ ativo e inativo. Os níveis séricos de anti-CHR e IgG/IgG3 anti-NCS não diferiram entre LESJ ativo e inativo. Houve correlação entre o SLEDAI e os anticorpos anti-dsDNA, mas não com os anticorpos contra outros componentes da cromatina. Houve associação de anticorpos anti-dsDNA, anti-CHR e IgG/IgG3 anti-NCS com proteinúria e baixos níveis séricos de C4. Foram observados anticorpos anti-NCS em 14% dos pacientes com LESJ na ausência de anticorpos anti-dsDNA. CONCLUSÕES: Nossos dados indicam que os anticorpos anti-NCS e anti-CHR são marcadores diagnósticos relevantes para LESJ e parecem estar correlacionados com a atividade da nefrite lúpica no LESJ. O anticorpo IgG3 anti-NCS não parece ser mais relevante como marcador de atividade da doença ou nefrite ativa no LESJ em comparação ao anticorpo IgG anti-NCS.

OBJECTIVES: To determine the frequency of antibodies to chromatin components in juvenile systemic lupus erythematosus (JSLE), and to correlate the presence of these autoantibodies with clinical manifestations and disease activity. METHODS: Anti-chromatin (anti-CHR), anti-nucleosome core particle (anti-NCS) and anti-dsDNA antibodies were measured in 175 individuals, including 37 patients with active JSLE and 41 with inactive disease, 47 non-lupus autoimmune disease patients (non-lupus AD), and 50 healthy children. An in-house ELISA was developed with purified nucleosome core particles from calf thymus to determine IgG and IgG3 anti-NCS antibodies. Anti-CHR and anti-dsDNA antibodies were detected by commercial ELISA kits (INOVA). RESULTS: Anti-NCS and anti-CHR antibodies exhibited high specificity for JSLE and similar frequency in active and inactive JSLE. Anti-CHR and IgG/IgG3 anti-NCS serum levels did not differ between active and inactive JSLE. SLEDAI correlated with anti-dsDNA antibodies but not with antibodies to other chromatin components. There was association of anti-dsDNA, anti-CHR and IgG/IgG3 anti-NCS antibodies with proteinuria and low C4 serum levels. Anti-NCS antibodies in the absence of anti-dsDNA were observed in 14% of the JSLE patients. CONCLUSIONS: Our data indicate that anti-NCS and anti-CHR antibodies are relevant diagnostic markers for JSLE and appear to be correlated with JSLE lupus nephritis activity. IgG3 isotype anti-NCS antibodies do not seem to be more relevant than IgG anti-NCS antibodies as markers of disease activity or active nephritis in JSLE.

Observation of sex chromatin in exhumed bones, evaluation of their diagnosis value / Observación de la cromatina sexual en osamentas exhumadas, evaluación de su valor diagnóstico

Observation of sexual chromatin has shown to be very helpful in gender forensic diagnosis. In the present study we analyzed the diagnosis performance of the method in, non-treated or treated with conventional bone techniques, exhumed bone pieces. We used long bones of male and female individuals, the method applied is described in Suazo et al. (2010). In the non-treated exhumed pieces, the general accuracy of the method was 75 percent, while in the treated pieces the method was inapplicable due to the lack of cells in the tissue. Our results suggest that it is possible to determine the sex of aged human bones buried under different conditions through a fast and simple histological method, but the treatment with physical and chemical means eliminates the remaining cells in the bone tissue.

La observación de la cromatina sexual ha demostrado ser útil en el diagnóstico forense del sexo. En este estudio analizamos el rendimiento diagnóstico del método en piezas óseas exhumadas no tratadas y tratadas mediante osteotécnica convencional. Utilizamos muestras de huesos largos de individuos de sexo masculino y femenino, el método se aplicó de acuerdo a lo descrito por Suazo et al., (2010). En las piezas exhumadas no tratadas la exactitud general del método fue del 75 por ciento, mientras que en las piezas tratadas el método resultó inaplicable, debido a la ausencia de células en el tejido. Nuestros resultados sugieren que es posible determinar el sexo en osamentas humanas exhumadas de larga data y en diferentes condiciones de enterramiento, mediante un método histológico rápido y sencillo, pero que el tratamiento por medios físicos y químicos elimina las células remanentes en el tejido óseo.